Locită europeană la albine
Locuția europeană este o boală infecțioasă a puietului deschis de albine, însoțită de moartea în masă și putrezirea larvelor. Boala afectează coloniile de albine cel mai adesea vara. Cum se identifică locurile europene și cum se previne răspândirea acesteia?
Simptomele clinice ale locului european (EFB) au fost descrise încă din 1885. Mai târziu, în 1912, White (G. F. White, SUA) a identificat agentul cauzal al bolii - Bacillus pluton, iar în 1982 agentul infecțios a fost redenumit Melissococcus plutonius. Este o bacterie gram-pozitivă în formă de tijă cu capete ușor rotunjite, formând perechi, lanțuri, ciorchini (Fig. 1, 2).
Orez. 1 Micrografie electronică a Melissococcus plutonius (Forsgren, 2010)
Orez. 2 colonii de Melissococcus plutonius (Forsgren et al., 2013)
Simptome, transmitere
Ținta principală sunt larve desigilate de 3-5 zile de albine lucrătoare, trântori, matci ale albinei Apis mellifera. Cu cât larva este mai în vârstă, cu atât este mai puțin sensibilă la Melissococcus plutonius. Potrivit oamenilor de știință elvețieni, în majoritatea coloniilor de albine cu formă deschisă de infecție (91%), încărcătura bacteriană a depășit 50.000 CFU/individ. La larvele și pupele sănătoase în exterior, agentul patogen a fost detectat mai rar decât la larvele cu semne vizibile ale bolii.
Orez. 3 Larve infectate cu Melissococcus plutonius (conform http://www.blackburnbeekeepers.com)
Larvele infectate se caracterizează printr-o activitate crescută. Se găsesc în partea de jos, la mijloc, la margine, de-a lungul pereților celulelor. Traheea și intestinele sunt clar vizibile. Cheaguri albe apar în intestinul mijlociu al larvelor. Segmentarea dispare. Culoarea se schimbă de la alb perlat la galben pal (Fig. 3). În perioada de degradare, larvele moi cad în fundul celulelor și nu maipoate fi îndepărtat în întregime (Fig. 4). Uscandu-se, iau forma unor cruste maro inchis, usor despartite de peretii celulelor (Fig. 5). Forma latentă a infecției permite larvelor să supraviețuiască și contribuie la răspândirea în continuare a agentului patogen. Poate că acesta este motivul reapariției anuale a loitei europene, care a devenit o problemă serioasă pentru apicultorii englezi. Forma letală cu simptome severe duce la moartea puietului.
Orez. 4 Încercați să eliminați larva din celulă (conform http://www.blackburnbeekeepers.com)
Orez. 5 Simptome de luptă europeană la larve (Forsgren et al., 2013)
Mirosul acru care apare la un numar mare de larve moarte se datoreaza infectiei secundare cu Enterococcus faecalis, Paenibacillus alvei. Prezența acestor microorganisme este considerată o dovadă concludentă a EFB. Concomitent cu Melissococcus plutonius, sunt adesea detectate bacterii aerobe saprofite Achromobacter euridice, care sunt absente în intestinele larvelor sănătoase.
Puietul sigilat dezvoltă simptome greu de distins de puietul american.
Principala cale de infectare este hrana infectată a larvelor. În condiții de laborator, la larvele de 2 zile, simptomele descrise mai sus au fost induse prin inocularea suspensiei cu Melissococcus plutonius. Introducerea a două sute de celule bacteriene este suficientă pentru manifestarea infecției, potrivit cercetătorilor australieni.
Pentru reproducere, agentul infecțios selectează intestinul mediu. Treptat, lumenul său este complet umplut cu celule bacteriene. Prin membrana (matricea) peritrofică deteriorată, care separă celulele epiteliale ale intestinului mijlociu de alimentele ingerate, agentul patogen pătrunde nu numai în intestin, ci și în alte organe și țesuturi.
Încărcătură bacteriană maremuncitorii adulți care ies din puiet infectat, albinele mai curate care îndepărtează puietul bolnav și mort, devin purtători, răspândind Melissococcus plutonius atât în interiorul, cât și în afara coloniei de albine. Albine purtătoare au fost găsite în fiecare al treilea stupină exterior sănătoasă, situată în apropierea stupinelor infectate, și în toate stupinele cu manifestări clinice ale bolii. În stupinele cu o formă deschisă de infecție, predomină diseminarea agentului patogen între adulți. Infecția are loc prin polen și fecale lăsate pe pereții celulelor. Transmiterea vectorială este posibilă - prin clești destructor Varroa. Zonele în care agentul patogen nu a fost detectat (EFB–) sunt considerate potențial libere de Melissococcus plutonius.
Orez. 6 Melissococcus plutonius atipic (Mp) în lumenul intestinului mediu (A, B) care înconjoară matricea peritrofică (D); atacând microvilozitățile celulelor epiteliale ale intestinului mediu (F) (Takamatsu și colab., 2015)
În centrele regionale ale Japoniei, celulele bacteriene asemănătoare Melissococcus plutonius, numite atipice, au fost adesea izolate din larvele EFB+. Ca și Melissococcus plutonius, în condiții anaerobe formează colonii opace albe vizibile de până la 1 mm în diametru. Sunt localizate în principal în lumenul intestinului mediu, în jurul matricei peritrofice, dar nu pătrund adânc în organe și țesuturi (Fig. 6). În a doua sau a treia zi după introducerea Melissococcus plutonius atipic, larvele au încetat să crească (Fig. 7), și-au pierdut elasticitatea, au devenit gălbui și apoase. În a cincea zi, aproape toată lumea a murit. În același timp, 94,3% dintre larvele infectate cu Melissococcus plutonius tipic au supraviețuit.
Orez. 7 Larve infectate cu Melissococcus plutonius (rândul de sus) și Melissococcus plutonius atipic (rândul de jos) (Arai șial., 2012)
Încă din 1983, L. Bailey (Marea Britanie) a descris locurile europene ca „uneori care apar în forme severe și dispar spontan de la mijlocul verii”. Ulterior, cuvintele omului de știință au fost confirmate. După o pauză de 30 de ani în 2010, a fost înregistrat un focar de EFB în Regatul Unit, Norvegia și câțiva ani mai târziu în Germania. Majoritatea larvelor au murit într-o perioadă scurtă de timp, de obicei în mijlocul verii. Creșterea incidenței a fost asociată cu lipsa de hrană, apă, o densitate mare a coloniilor de albine, stupine, vreme și condiții geografice.
Diagnostic
Prezența bolii este adesea apreciată de puietul pestriț (Fig. 8). Dar pui asemănător poate fi produs și de mătcile consangvinizate. Cu infecția simultană a puietului nesigilat și sigilat, diagnosticul vizual poate fi dificil din cauza dezvoltării unei infecții mixte (loc european - american - puiet sac). Pentru a confirma diagnosticul prin semne externe în laborator, se utilizează testul imunosorbent legat de enzime (ELISA), hibridizarea ADN-ului și metoda PCR. Alegerea mierii ca probă nu are succes în totalitate, deoarece prezența unui agent infecțios în ea nu reflectă întotdeauna severitatea bolii.
Orez. 8 Puiet pestriț (Forsgren și colab., 2013)
Măsuri terapeutice și preventive
Oxitetraciclina aplicată (OTP, sinonim: terramicină) are doar un efect bacteriostatic asupra Melissococcus plutonius: după 12 luni, 72% din stupine au rămas EFB-pozitive, după 24 de luni - 17%, în următorii patru ani - mai puțin de 10%. Prezența constantă a unui număr mic de stupine infectate poate provoca un nou focar al bolii.
Efectul toxic al terramicinei asupra puietului nesigilat este evidențiat de studii de engleză șioameni de știință americani. Mortalitatea mare a larvelor (aproximativ 80%) a fost observată după aplicarea OTP în doză de 10 mg substanță activă/g zahăr. În a șaptea zi după hrănirea terapeutică cu OTP + zahăr pudră (1:2) și OTP + sirop de zahăr (1 g/200–250 ml), 56 și, respectiv, 33% din larve au murit. Mai mult de jumătate din puiet (70%) au supraviețuit la o doză de lincomicină de 50 mg ia/g zahăr. Cantitatea recomandată de tilozină (10 mg/g zahăr) și lincomicină (10 mg/g zahăr) a provocat moartea a 12-18% dintre larve. Același număr de puiet morți a fost notat printre cei care nu au fost expuși la antibiotice.
Cantitatea reziduală de terramicină din miere la o săptămână după aplicarea OTP + zahăr pudră și OTP + sirop de zahăr a variat de la 1,6 la 22 mg/kg și, respectiv, de la 26 la 150 mg/kg; după 12 săptămâni a scăzut la o medie de 0,26 și 0,44 mg/kg. O scădere a conținutului de antibiotic din produs cu 10,2% a fost, de asemenea, observată după pasteurizare. Cu o creștere a timpului de păstrare a mierii de până la 30–90–180 de zile la o temperatură de 20±5 °C, cantitatea de OTP a scăzut cu 16,4–47,3–82,7%, respectiv. O scădere de 50% a nivelului de terramicină a fost observată după 42 de zile la 35°C. Rezultate similare au fost obținute în analiza altor reprezentanți ai seriei de tetracicline: doxiciclină, tetraciclină, clorhidrat de tetraciclină.
Dezinfectarea stupilor și a uneltelor cu 5% carbonat de sodiu (carbonat de sodiu) sau hidroxid de sodiu 4% (sodă caustică, sodă caustică) a redus încărcătura bacteriană la albinele lucrătoare, dar nu a prevenit focarul, potrivit oamenilor de știință elvețieni.